REF 20 100 / 20 160 07584E - CN - 2004/05

® 20 E

腸桿菌和其它革蘭氏陰性桿菌鑒定系統(tǒng)

概要說(shuō)明

API 20 E 是腸桿菌科和其它非苛養(yǎng) G-桿菌的標(biāo)準(zhǔn)鑒定系

統(tǒng) 包括 21 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化微型生化測(cè)試和鑒定資料庫(kù) 可鑒定

的菌譜名錄 請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)后的鑒定表

原理

API 20 E 試驗(yàn)條是由 20 個(gè)含干燥底物的小管所組成 這些

測(cè)定管用細(xì)菌懸浮液接種 培養(yǎng)一定時(shí)間後 通過(guò)代謝作

用產(chǎn)生顏色的變化 或是加入試劑後變色而觀察其結(jié)果

根據(jù)說(shuō)明表判讀反應(yīng) 參照分析圖索引或使用鑒定軟件得

到鑒定結(jié)果

試劑盒內(nèi)容物

25  測(cè)試試劑盒 ( 貨號(hào). 20 100)

- 25 API 20 E 試條

- 25 培養(yǎng)盒

- 25 結(jié)果報(bào)告單

- 1 個(gè)封口夾

- 1 份產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

100 測(cè)試試劑盒 ( 貨號(hào). 20 160)

- 100 API 20 E 試條 (4x25 試條)

- 100 培養(yǎng)盒

- 100 結(jié)果報(bào)告單

-  1 個(gè)封口夾

-  1 份產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

試條的成分

API 20 E 試條的成分請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū)后的結(jié)果判讀表

必需但未提供的試劑和材料

試劑

- 0.85 % API NaCl 培養(yǎng)基 5 ml (Ref. 20 230) or

API 懸浮培養(yǎng)基 5 ml (Ref. 20 150)

- API 20 E 附加試劑盒 (Ref. 20 120) 或

單個(gè)的附加試劑  TDA (Ref. 70 402)

JAMES (Ref. 70 542)

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422)

NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn 試劑 (Ref. 70 380)

- 氧化酶 (Ref. 55 635*)

* 目錄中沒(méi)有銷(xiāo)售的國(guó)家 請(qǐng)使用相近的試劑

- 礦物油 (Ref. 70 100)

- API 20 E 數(shù)值分析圖譜(Ref. 20 190) 或

鑒定軟件

材料

- 吸管或 PSI 管

- 安瓿開(kāi)啟器

- 安瓿架

- 微生物實(shí)驗(yàn)室一般設(shè)備

可能需要的附加試劑

- API OF 培養(yǎng)基 (Ref. 50 110) :

用于測(cè)定發(fā)酵型或氧化型代謝作用

- API M 培養(yǎng)基 (Ref. 50 120) :

用于測(cè)定兼性厭氧菌的運(yùn)動(dòng)性

警告和注意

•  僅供體外診斷和微生物質(zhì)控使用

•  僅供專(zhuān)業(yè)人員使用

• 此試劑盒中含有動(dòng)物源性成分 已知所使用原始材料和動(dòng)

物的衛(wèi)生狀況不能*保證其不含傳染性的物質(zhì) 因此我

們建議所有樣品應(yīng)被視為具有傳染性 并應(yīng)按通常的安全

措施對(duì)其進(jìn)行正確處理 勿吸入或咽下

• 所有標(biāo)本 細(xì)菌培養(yǎng)物 接種物應(yīng)被視為 具有傳染性并

應(yīng)進(jìn)行正確處理 在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中 要遵守?zé)o菌技術(shù)要

求和通常使用的防范措施 可參照 NCCLS M29-A 保

護(hù)試驗(yàn)室工作人員免受儀器生物公害和通過(guò)血液 體液

組織傳染的疾病的侵害-當(dāng)前版本 的內(nèi)容 另外的防護(hù)

措施 可參照 微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物研究安全

-CDC/NIH – 新版本 或參照各國(guó)正在使用的規(guī)章執(zhí)

行

• 不要使用過(guò)期的試劑

• 使用前 請(qǐng)檢查包裝和成分是否完整

• 不要使用已經(jīng)破損的試條 杯子破壞 干燥劑小袋已打開(kāi)

等

• 有關(guān)產(chǎn)品性能的數(shù)據(jù)均由嚴(yán)格按照作步驟所進(jìn)行的試驗(yàn)得

出 任何操作步驟的改變或偏離均會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果

• 試驗(yàn)結(jié)果的判斷應(yīng)由合格的微生物家所作 同時(shí)應(yīng)將病

史 標(biāo)本來(lái)源 菌落和顯微形態(tài)考慮在內(nèi) 如有可能 再

作一些附加試驗(yàn) 尤其是抗生素敏感譜

儲(chǔ)存條件

試驗(yàn)條采用鋁袋包裝并附有干燥劑

一旦打開(kāi)鋁袋(*) 請(qǐng)使用封口夾(試劑盒已含有)重新封口

以保證試條的干燥 把鋁袋撕開(kāi)處末端放入打開(kāi)的夾子并

小心的加緊兩端 開(kāi)啟鋁袋后 在 2-8 環(huán)境下 試驗(yàn)條可

享有 10 個(gè)月的有效期(或包裝盒上的有效期 以較短時(shí)間

為準(zhǔn))

(*) 建議開(kāi)封的方法 在封口下方剪開(kāi)鋁箔裝 為防止意外

損壞干燥劑 開(kāi)封時(shí)應(yīng)保持鋁箔袋垂直

標(biāo)本  采集和前處理

API 20 E 不能直接用于臨床或其他標(biāo)本

需要進(jìn)行鑒定的微生物必須首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)微生物處理技術(shù)

于適合腸桿菌和/或非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌的培養(yǎng)瓊脂 例

如 麥康凱 上培養(yǎng)分離

IVD

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api ® 20 E  07584E –  CN - 2004/05

bioMérieux ® SA 中文 - 2

使用說(shuō)明

氧化酶試驗(yàn)

必須按照制造商的使用說(shuō)明進(jìn)行氧化酶試驗(yàn) 由于它是

終圖譜的主要數(shù)據(jù) 請(qǐng)將其記錄于結(jié)果報(bào)告單上 第二十

一個(gè)試驗(yàn)

試條的準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備一個(gè)培養(yǎng)盒 盤(pán)和蓋子 倒入約 5ml 蒸餾水或軟化

水[或其它不含雜質(zhì)或產(chǎn)生揮發(fā)性氣體的化學(xué)物質(zhì) 如

Cl2, CO2,等 ]于盤(pán)的蜂窩小凹中 造成一個(gè)濕室

• 在盤(pán)的沿邊寫(xiě)上菌株號(hào)(不要寫(xiě)在蓋上 以免錯(cuò)放)

• 從包裝中取出試驗(yàn)條放到盤(pán)中

• 將試條置于孵育箱內(nèi)

注意 API 20 E 只能用于腸道細(xì)菌和或非苛養(yǎng)的 G- 桿菌

苛養(yǎng)菌主要指對(duì)營(yíng)養(yǎng)需求有特殊需要的菌(例 布魯氏菌屬

Brucella 和 法朗西絲菌屬 Francisella) 這些菌沒(méi)有包括在

API 20 E 數(shù)據(jù)庫(kù)中 必須采用有效方法 排除這些菌的存

在

接種物的準(zhǔn)備

• 根據(jù)"警告及注意"一欄所列方法打開(kāi)一安瓿 API 0.85%

NaCl 培養(yǎng)基 (5ml)或一安瓿 API 懸浮培養(yǎng)基(5 ml) 或

使用 5ml 0.85 %無(wú)雜質(zhì) 無(wú)菌鹽水

• 用吸管或接種針從分離物的平板上挑取單個(gè)分純菌落至懸

浮基物中 建議使用新鮮培養(yǎng) 18-24 小時(shí)

• 仔細(xì)研勻以達(dá)到均一的細(xì)菌懸液

制備好的菌懸液必須立即使用

注意 大多數(shù)弧菌 Vibrio 均嗜鹽 如懷疑菌株為弧菌

請(qǐng)使用 0.85% NaCl (5ml) 培養(yǎng)基

試條的接種

• 用同一根吸管 將菌懸液充滿(mǎn) CIT VP 和 GEL 管

的管部和杯部

• 其它管僅充滿(mǎn)管部(不是杯部)

• ADH, LDC, ODC, H 2 S 和 URE 管 用礦物油覆蓋 以形

成厭氧環(huán)境

• 蓋上培養(yǎng)盒

• 于 36°C ± 2°C 孵育 18-24 小時(shí)

判讀和解釋

試條的判讀

• 孵育后 根據(jù)使用手冊(cè)中的讀數(shù)表判讀各反應(yīng)結(jié)果

• 如果 3 個(gè)或 3 個(gè)以上測(cè)定 GLU 試驗(yàn)+或- 為陽(yáng)性結(jié)果

記錄所有自發(fā)反應(yīng)于結(jié)果報(bào)告單上并觀察需要附加試劑的

試驗(yàn)的結(jié)果

- TDA 試驗(yàn) 加 1 滴 TDA 試劑  深褐色為 陽(yáng)性反應(yīng) 記

錄于報(bào)告單上

- IND 試驗(yàn) 加 1 滴 JAMES 試劑 反應(yīng)立即發(fā)生  粉紅

色出現(xiàn)在整個(gè)反應(yīng)應(yīng)管者為 陽(yáng)性 記錄于報(bào)告單上

- VP 試驗(yàn) 加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑 至少等待

10 分鐘  淺粉或 紅色表明為 陽(yáng)性結(jié)果 記錄于報(bào)告單

上 如 淺粉紅色在 10 至 12 分鐘內(nèi)出現(xiàn) 判斷結(jié)果為 陰

性

注意 吲哚產(chǎn)生試驗(yàn)必須后進(jìn)行 因?yàn)樵摲磻?yīng)釋放的氣

體產(chǎn)物會(huì)干擾試條的其他試驗(yàn) 在加入附加試劑后 請(qǐng)小

心勿調(diào)換培養(yǎng)盒蓋

• 如果加入附加試劑前陽(yáng)性結(jié)果 包括 GLU 試驗(yàn) 的數(shù)量

少于 3 個(gè)

- 重新培養(yǎng) 24 小時(shí) ± 2小時(shí) 且不要加任何試劑

- 重新進(jìn)行需要加入附加試劑的測(cè)試 如前說(shuō)明

- 為了完成鑒定 可能需要進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn) 參考有關(guān)鑒定

的段落

解釋

鑒定結(jié)果從 數(shù)字索引中獲得

• 所得的反應(yīng)結(jié)果編為數(shù)字圖譜

所得反應(yīng)的類(lèi)型必須以數(shù)字化形式記錄在報(bào)告單 每 3 個(gè)

測(cè)定為一組 每個(gè)以 1 2 和 4 標(biāo)明 在每組中 陽(yáng)性反

應(yīng)以相應(yīng)的數(shù)字相加 由 API 20 NE 的 20 個(gè)測(cè)定可得一

個(gè) 7 位數(shù) 氧化酶反應(yīng)構(gòu)其第 21 個(gè)反應(yīng) 如陽(yáng)性則為

4

• 鑒定

使用數(shù)據(jù)庫(kù) (V4.0)進(jìn)行鑒定

* 根據(jù)數(shù)字圖譜

- 從使用手冊(cè)的讀數(shù)表中尋找數(shù)字圖譜

* 使用鑒定軟件

- 在鍵盤(pán)上輸入 7 位阿拉伯?dāng)?shù)字的圖譜

在某些情況下 7 位數(shù)檢索編碼還不能區(qū)分細(xì)菌 必須進(jìn)行

以下一些補(bǔ)充試驗(yàn)

- 硝酸鹽還原到亞硝酸鹽(NO2)和氮?dú)?N2) 各加一滴 Nit

1 和 Nit 2 試劑于葡萄糖 GLU 管內(nèi) 待 2~3 分鐘后  紅

色表示 陽(yáng)性結(jié)果(NO2) 陰性反應(yīng) 黃色 可能由于還原

至 N2 有時(shí)還有氣泡 加 2-3mg 鋅粉到葡萄糖 GLU

管 5 分鐘后 如果管保持 黃色表示 陽(yáng)性結(jié)果(N2) 記錄

于報(bào)告單 如果測(cè)定變 粉紅 這明是 陰性反應(yīng) 硝酸鹽仍

留管內(nèi) 被鋅粉還原 該反應(yīng)用于檢測(cè)革蘭陰性 氧化酶

陽(yáng)性的桿菌

注意 出于和吲哚試驗(yàn)同樣的原因 參考 試條的判讀

中的注意項(xiàng) 硝酸鹽還原試驗(yàn)必須后進(jìn)行

- 動(dòng)力 (MOB) 接種一安瓿 API M 培養(yǎng)基 參見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明

書(shū)

- 麥康凱 MacConkey 培養(yǎng)基生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)(McC) 接種一個(gè)

麥康凱 MacConkey 平板 參見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

- 葡萄糖氧化 (OF-O) 接種一安瓿 API OF 培養(yǎng)基 參見(jiàn)

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

- 葡萄糖發(fā)酵 (OF-F) 接種一安瓿 API OF 培養(yǎng)基 參見(jiàn)

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

這些在數(shù)值編碼本開(kāi)始部分有所介紹的補(bǔ)充試驗(yàn) 可以組

成 9 位數(shù)的數(shù)值索引 從而可以用鑒定軟件獲得鑒定結(jié)

果

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

如果分辨率很低 提議進(jìn)行進(jìn)一步的試驗(yàn) 請(qǐng)參考鑒定軟

件或數(shù)值分析索引

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質(zhì) 量 控 制

培養(yǎng)基 試驗(yàn)條和試劑在有效期內(nèi)不同階段需作系統(tǒng)的質(zhì)量控制 對(duì)進(jìn)行質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室 推薦標(biāo)準(zhǔn)菌株 1.  大腸埃希菌

Escherichia coli ATCC ® 25922 或以下菌株之一

2.  嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌 Stenotrophomonas maltophilia

ATCC 51331

3.  陰溝腸桿菌 Enterobacter cloacae

ATCC 13047

4.  奇異變形桿菌 Proteus mirabilis

ATCC 35659

5.  肺炎克雷伯菌肺炎亞種 Klebsiella pneumoniae ssp

pneumoniae  ATCC 35657

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

ONPG ADH LDC ODC CIT H 2 S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO 2 N 2 *

1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + –

2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – –

3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + –

4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + –

5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* ATCC 13047 和 ATCC 25922 菌株可能會(huì)觀察到 N 2 (+)結(jié)果

• ATCC 51331 菌株于胰酶大豆血瓊脂上孵育 24-48 小時(shí) 可以獲得反應(yīng)圖譜

• 其他的菌株于胰酶大豆血瓊脂上孵育 18-24 小時(shí) 可以獲得反應(yīng)圖譜

• 請(qǐng)使用 API NaCl 0.85 % 培養(yǎng)基制備菌懸液

根據(jù)當(dāng)?shù)叵鄳?yīng)的規(guī)定進(jìn)行質(zhì)量控制是使用者的責(zé)任

方法 的 局限 性

• API 20 E 鑒定系統(tǒng)能準(zhǔn)確鑒定在鑒定范圍 請(qǐng)查閱該說(shuō)

明書(shū)后的鑒定表 內(nèi)的腸道細(xì)菌和非苛養(yǎng) 革蘭氏陰性桿

菌菌種 但不能用于鑒定/排除鑒定范圍外的微生物

• 由于在反應(yīng)原理上 API 技術(shù)與傳統(tǒng)技術(shù)間存在差異 有可

能出現(xiàn)與常規(guī)方法不同的生化反應(yīng)結(jié)果 同時(shí)由于所用底

物的差異亦造成陽(yáng)性反應(yīng)百分比的不同

• 在某些非常罕見(jiàn)的情況下 某些微生物如克雷伯菌屬

Klebsiella 或變形菌屬 Proteus 與葡萄糖的反應(yīng)可

能會(huì)由陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?例如可以觀察到藍(lán)綠色變化 這

個(gè)反應(yīng)將記錄為陰性反應(yīng) 這種情況已經(jīng)被反映到鑒定表

中的鑒定百分率上

• 如 果 鑒 定 為 沙 門(mén) 菌  Salmonella  或 志 賀 菌

Shigella 請(qǐng)進(jìn)行血清學(xué)鑒定以確認(rèn)鑒定結(jié)果

• 分離自膽囊纖維化病人的非發(fā)酵革蘭陰性桿菌可能會(huì)產(chǎn)生

不典型的生化圖譜 影響鑒定的結(jié)果

• 必須使用單個(gè)微生物的純培養(yǎng)

預(yù) 期 值范圍

參閱在本說(shuō)明書(shū)尾部的 反應(yīng)鑒定表 以取得有關(guān)各種生

化反應(yīng)陽(yáng)性率的資料

性能

• 腸桿菌

對(duì)共 5514 株 本產(chǎn)品鑒定范圍內(nèi)的 不同來(lái)源的臨床及

收藏菌株鑒定結(jié)果顯示

- 92.80 % 的菌株可被準(zhǔn)確鑒定 需要或不需附加檢測(cè)

- 4.61 % 的菌株無(wú)法鑒定

- 2.59 % 的菌株被錯(cuò)誤鑒定

• 其它非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌

對(duì)共 2386 株 本產(chǎn)品鑒定范圍內(nèi)的 不同來(lái)源的臨床及

收藏菌株鑒定結(jié)果顯示

- 90.32 % 的菌株可被準(zhǔn)確鑒定 需要或不需附加檢測(cè)

- 6.16 % 的菌株無(wú)法鑒定

- 3.52 % 的菌株被錯(cuò)誤鑒定

廢 物處理

所有使用或未使用的試劑和其他污染性材料應(yīng)遵循傳染性

或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型和危險(xiǎn)性級(jí)別進(jìn)行

廢物和污物的處理 同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)的規(guī)定對(duì)待和處

理所有的廢物和污物

擔(dān)保

生物梅里埃 bioMérieux 拒絕任何形式的擔(dān)保 明確的或暗

指的 包括任何暗含的商業(yè)性和具有特殊用途適用性的擔(dān)

保 生物梅里埃 bioMérieux 將不對(duì)任何偶然的和相因而生

的損害承擔(dān)義務(wù) 生物梅里埃也不會(huì)對(duì)任何使用者提出的

超過(guò)其用于支付購(gòu)買(mǎi)生物梅里埃產(chǎn)品或服務(wù)的償還要求承

擔(dān)義務(wù)

結(jié) 果 判 讀 表

結(jié)果

試驗(yàn) 有效成分

量

(mg/cup.)

反應(yīng)/ 酶

陰性 陽(yáng)性

ONPG

鄰硝基苯-半乳糖苷

0.223

β-半乳糖苷酶 無(wú)色 黃色(1)

ADH 精氨酸 1.9 精氨酸雙水介酶 黃色 紅/橙色(2)

LDC 賴(lài)氨酸 1.9 賴(lài)氨酸脫羧酶 黃色 橙色(2)

ODC 鳥(niǎo)氨酸 1.9 鳥(niǎo)氨酶脫羧 黃色 紅/橙色(2)

CIT 檸檬酸鈉

0.756

檸檬酸利用 淡綠/黃 蘭綠/蘭(3)

H2S 硫代硫酸鈉 0.075 H2S 產(chǎn)生 無(wú)色/微灰 黑色沉淀/細(xì)線(xiàn)

URE 脲素 0.76 脲酶 黃色 紅/橙色(2)

TDA /立即

TDA 色氨酸

0.38

色氨酸脫氨酶

黃色 深褐

JAMES / 立即

IND 色氨酸

0.19

吲哚產(chǎn)生

無(wú)色/淺綠/黃色

粉紅

VP 1 + VP 2 / 10 分鐘

VP 丙酮酸鹽 1.9

3-羥基丁酮產(chǎn)生乙酰甲基甲

醇

無(wú)色 粉紅/紅色 (5)

GEL

Kohn 明膠 0.6 明膠酶 黑色素不擴(kuò)散 黑色素?cái)U(kuò)散

GLU

葡萄糖

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

MAN

甘露醇

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

INO

肌醇

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

SOR

山梨醇

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

RHA

鼠李糖

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

SAC

蔗糖

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

MEL

密二糖

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

AMY

苦杏仁苷

0.57 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

ARA

阿拉伯糖

1.9 發(fā)酵/氧化(4)

蘭/蘭綠 黃色

OX (看氧化酶試驗(yàn)說(shuō)明書(shū)) 細(xì)胞色素氧化酶 (看氧化酶試驗(yàn)說(shuō)明書(shū))

(1)  出現(xiàn)淺黃色應(yīng)判斷為陽(yáng)性結(jié)果

(2)  孵育 36-48 小時(shí)后 出現(xiàn)橙色應(yīng)判斷為陰性結(jié)果

(3)  讀小杯頂部的結(jié)果 需氧

(4)  發(fā)酵始于小管的底部 氧化開(kāi)始于杯部

(5)  10 分鐘后出現(xiàn)的淺粉紅色應(yīng)判斷為陰性結(jié)果

• 標(biāo)示的量可能因使用原料的濃度不同而有所調(diào)整

• 某些杯含有動(dòng)物源性產(chǎn)品 特別是蛋白胨

梅里埃20100 腸桿菌鑒定試劑盒API20E

梅里埃20100 腸桿菌鑒定試劑盒API20E